利用凱氏定氮儀測量牛乳中蛋白質的含量
在用國標法測定牛乳中的蛋白質時，采用多孔井式電加熱爐對牛乳樣品進行消化，在加入適量廉價的催化劑后，將消化爐的電壓調至220v 時，消化一份牛乳樣品僅需 100～105min。試驗結果表明，本方法具有精密（變異系數=0.62%）、準確、穩定、簡單、快速、安全等優點，可以滿足批量樣品的檢測需要，下面一起學習一下利用凱氏定氮儀測量牛乳中蛋白質的含量。
蛋白質是復雜的含氮有機化合物，主要是由各種氨基酸構成。它是牛乳的重要組成成分，亦是重要的營養物質。蛋白質的法定測定方法，以凱達爾氏發明的定氮法為基礎，根據各種蛋白質皆各有固定比數的氮這一事實，通過對氨的測定而推算出蛋白質含量，此法所得的含氮量除了確實屬于蛋白質組成成分的氮以外，還包括非蛋白質組成的其他有機及無機態氮，所以換算所得的蛋白質含量稱作為粗蛋白含量。蛋白質測定儀就是利用這一經典的測定蛋白質含量的方法研發制成，所得結果準確、穩定，但測定時間較長，一般一份樣品至少需要6～8h 始得結果。本文采用井式電加熱爐，增大消化管的受熱面積，使消化管內的試樣及濃H2SO4在井式電加熱爐內取得最大的熱效應，同時在消化前置入適宜的廉價催化劑，從而大大縮短了消化時間。
本文采用的方法能對牛乳中的蛋白質進行快速測定。牛乳中的蛋白質是含氮的有機化合物，樣品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨，然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再用鹽酸標準溶液滴定，根據酸的消耗量計算出氮的含量，再乘以換算系數即得蛋白質含量。
儀器設備與試劑：KDN—08A定氮儀（浙江托普儀器有限公司）；電子分析天平；硫酸（H2SO4，分析純，比重1.84）；硫酸銅（CuSO45H2O，分析純）；硫酸鉀（K2SO4，分析純）；40%氫氧化鈉（NaOH）；2%硼酸（H3BO3）；1mol/L 鹽酸（HCl）；混合指示劑：0.1%甲基紅乙醇溶液+0.5%溴甲酚綠乙醇溶液（1∶ 1 ）。
樣品處理：精確稱取樣品5.0g于消化管中，加入0.5gCuSO45H2O、5.0gK2SO4，再沿消化管壁徐徐加入10mlH2SO4（比重1.84），并輕輕搖蕩，使樣品全部被脫水炭化。
消化：將消化管分別放入消化架各個孔內，然后置于消化爐上，并立即開啟抽吸泵水閥，使抽吸泵處于吸氣狀態。接通電源，在加熱初始階段，須注意觀測，防止試樣因急沸而飛濺（初化時，電壓調至180～190v）。待泡沫停止后，將電壓調至220v，消化100～105min后冷卻。
蒸餾：
①在250ml 三角接受瓶中加入2%H3BO3 50ml 和2～3滴混合指示劑，將此瓶套在蒸餾器的接收管上，并且讓管口浸沒在H3BO3溶液中。
②在冷卻后的消化管中加入 50～80ml 蒸餾水，40～50ml 40%NaOH 溶液。
③扳動蒸餾托盤架把需要蒸餾的消化管固定在托盤架上，然后開啟蒸汽開關，向消化管內注入蒸汽，進行蒸餾。待接受瓶液面高于 150ml 刻度時，將接受瓶下移，使接受瓶離開液面。繼續蒸餾半分鐘，用蒸餾水洗瓶沖洗出氣口，然后取下接受瓶，待滴定之用。滴定用 0.1mol/LHCl 標準溶液滴定接受瓶內的溶液，滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止。記下消耗 HCl 的毫升數。
結果計算：
測定結果：
在消化管中加入供試樣品 5.0g，然后按照上述分析步驟進行測定（一次可以消化 8 個樣品），結果如表所示：
結論：
在用半微量凱氏定氮法測定牛乳中蛋白質的含量時，采用多孔井式電加熱爐，并在消化前置入適宜的廉價催化劑，對牛乳樣品進行消化，極大地提高了消化樣品的熱效應，同時將消化時間亦縮短了很多。牛乳蛋白質中含有7.1%（質量分數）的賴氨酸和2.6%（質量分數）的組氨酸，這兩種氨基酸中的氮在短時間內不易消化完全，往往導致總氮量偏低。消化時間過長會引起氨的損失。用本法測定牛乳中的蛋白質，消化一個樣品的時間為100～105min，變異系數為0.62%。本方法所得結果精密、準確、穩定、簡單、快速、安全，可以滿足批量樣品的檢測需要。
