葉綠素含量測定過程全解析
來源： www.1004-75.com 類別：實用技術 更新時間：2011-05-07 閱讀次
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已知葉綠素a、b的80%丙酮提取液在紅光區的最大吸收峰分別為663nm和645nm，又知在波長663nm下，葉綠素a、b在該溶液中的比吸收系數分別為82.04和9.27，在波長645nm下分別為16.75和45.60，可根據加和性原則列出以下關系式：
D663 = 82.04Ca+9.27Cb （1）
D645 = 16.75Ca+45.60Cb （2）
式（1）、（2）中的D663和D645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的光密度，Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度，以mg/L為單位。解方程組（1）、（2），得：
Ca = 12.72D663 – 2.59D645 （3）
Cb = 22.88D645 – 4.67D663 （4）
將Ca與Cb相加即得葉綠素總量（CT）：
CT = Ca + Cb =20.29D645 + 8.05D663 （5）
另外，由于葉綠素a、b在652nm的吸收峰相交，兩者有相同的比吸收系數（均為34.5），也可以在此波長下測定一次光密度（D652）而求出葉綠素a、b總量：
CT =（D652 × 1000）/ 34.5 （6）
在有葉綠素存在的條件下，用分光光度法可同時測定出溶液中類胡蘿卜素的含量。
Lichtenthaler等對Arnon法進行了修正，提出了80%丙酮提取液中三種色素含量的計算公式：
Ca = 12.21D663 – 2.81D646 （7）
Cb = 20.13D646 – 5.03D663 （8）
Cx·c=（1000D470 – 3.27Ca – 104Cb）/ 229 （9）
式中：Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度；Cx·C為類胡蘿卜素的總濃度；D663、D646和D470分別為葉綠體色素提取液在波長663nm、646nm和470nm下的光密度。
由于葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異，因此，在使用其他溶劑提取色素時，計算公式也有所不同。葉綠素a、b在96%乙醇中最大吸收峰的波長分別為665nm和649nm，類胡蘿卜素為470nm，可據此列出以下關系式：
Ca = 13.95D665 – 6.88D649 （10）
Cb = 24.96D649 – 7.32D665 （11）
Cx·c=（1000D470 – 2.05Ca – 114.8Cb）/ 245 （12）
以上就是實驗室測定葉綠素含量的全過程，是根據朗伯—比爾定律，某有色溶液的光密度D與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比，即：D=kCL。這是其中的標準方法，當然，我們有時也會選擇葉綠素測定儀來測定葉綠素含量，因為葉綠素測定儀快速、簡便，而且其結果精確度也很好，現在很多農業機構、大學、研究機構等，都紛紛置備葉綠素測定儀，用于葉綠素含量的快速測定。
已知葉綠素a、b的80%丙酮提取液在紅光區的最大吸收峰分別為663nm和645nm，又知在波長663nm下，葉綠素a、b在該溶液中的比吸收系數分別為82.04和9.27，在波長645nm下分別為16.75和45.60，可根據加和性原則列出以下關系式：
D663 = 82.04Ca+9.27Cb （1）
D645 = 16.75Ca+45.60Cb （2）
式（1）、（2）中的D663和D645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的光密度，Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度，以mg/L為單位。解方程組（1）、（2），得：
Ca = 12.72D663 – 2.59D645 （3）
Cb = 22.88D645 – 4.67D663 （4）
將Ca與Cb相加即得葉綠素總量（CT）：
CT = Ca + Cb =20.29D645 + 8.05D663 （5）
另外，由于葉綠素a、b在652nm的吸收峰相交，兩者有相同的比吸收系數（均為34.5），也可以在此波長下測定一次光密度（D652）而求出葉綠素a、b總量：
CT =（D652 × 1000）/ 34.5 （6）
在有葉綠素存在的條件下，用分光光度法可同時測定出溶液中類胡蘿卜素的含量。
Lichtenthaler等對Arnon法進行了修正，提出了80%丙酮提取液中三種色素含量的計算公式：
Ca = 12.21D663 – 2.81D646 （7）
Cb = 20.13D646 – 5.03D663 （8）
Cx·c=（1000D470 – 3.27Ca – 104Cb）/ 229 （9）
式中：Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度；Cx·C為類胡蘿卜素的總濃度；D663、D646和D470分別為葉綠體色素提取液在波長663nm、646nm和470nm下的光密度。
由于葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異，因此，在使用其他溶劑提取色素時，計算公式也有所不同。葉綠素a、b在96%乙醇中最大吸收峰的波長分別為665nm和649nm，類胡蘿卜素為470nm，可據此列出以下關系式：
Ca = 13.95D665 – 6.88D649 （10）
Cb = 24.96D649 – 7.32D665 （11）
Cx·c=（1000D470 – 2.05Ca – 114.8Cb）/ 245 （12）
以上就是實驗室測定葉綠素含量的全過程，是根據朗伯—比爾定律，某有色溶液的光密度D與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比，即：D=kCL。這是其中的標準方法，當然，我們有時也會選擇葉綠素測定儀來測定葉綠素含量，因為葉綠素測定儀快速、簡便，而且其結果精確度也很好，現在很多農業機構、大學、研究機構等，都紛紛置備葉綠素測定儀，用于葉綠素含量的快速測定。
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