蛋白質測定儀操作方法粗談
來源: 本站 類別:實用技術 更新時間:2010-08-17 閱讀次
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蛋白質測定儀操作方法粗談
蛋白質測定儀是用于測定糧食、食品、乳制品、飲料、飼料、土壤、水等物質中氮或者蛋白質含量的儀器,因為所測出的物質不僅含有蛋白質,同時還含有游離氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸鹽和氨等物質,因此該儀器又被稱為粗蛋白測定儀。
蛋白質測定儀包括兩個裝置:消化爐和蒸餾裝置,分別用來消化樣品以及蒸餾和滴定。浙江托普生產的蛋白質測定儀的消化爐有多種孔數選擇,如4孔、8孔、12孔和20孔,根據消化爐不同孔數,我們可以將定氮儀分為不同的型號。如KDN-04A、KDN-08C等。下面我們具體介紹下蛋白質測定儀在測定蛋白質含量時的操作步驟。
消化:稱取經粉碎的樣品0.5克(視含氮量而定),放入已洗滌烘干的消化管中,加催化劑5克左右和10ml左右硫酸(如果是固體樣品,最好在加濃硫酸前先加3ml左右的蒸餾水以濕潤樣品,以防止濃硫酸遇到強堿發生劇烈反應)。將消化管放入消化架的各個孔內,然后置于消化爐上,然后開啟抽氣三通上自來水龍頭,使抽氣三通處于吸氣狀態,接通電源開始消煮。消化管有不同的孔數區別,你可以按照樣品數的多少來選擇。每兩個消化爐孔共用一個進出水開關。
蒸餾:(1)打開電源,儀器自動進入加水狀態,待加水工作完成后會自動停止。(2)在左邊托盤放上空的消化管,右邊放上空的三角瓶,打開水龍頭開關。為排空管路內空氣,實驗前請先按下加酸鍵,待液體流順暢后停止加酸;加堿同樣操作。按下蒸餾鍵,儀器開始進入蒸餾狀態,待蒸氣自動從噴射管中噴出并穩定后,關閉開關。在左邊托盤放上已消化冷卻好的樣品,右邊托盤放上250ml三角瓶,并使管口碰到杯底。再打開電源,依次按加酸、加堿、蒸餾鍵對樣品進行蒸餾(加酸、加堿量設定自行)。蒸餾完畢后,將三角瓶下移,使接收管離開液面,用水沖洗出氣口,繼續蒸餾半分鐘后,取下三角瓶待滴定用。第二個樣品同上方法。(3)關開關,關水龍頭,取下消化管,打開側面排水夾子,把連堿泵的膠管放入蒸餾水容器內,打開電源開關用手按加堿按鍵抽蒸餾水清洗堿泵,酸泵同樣清洗,最后關電結束。
滴定:用0.1 NHCL滴定接收瓶內的溶液,滴定至粉紅色時為止,記下消耗HCL的毫升數,按下列式子計算蛋白含量:
蛋白質%=
式中:X—樣品中蛋白質的含量,%
V1—樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
V2—試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
N—硫酸或鹽酸標準溶液當量濃度;
0.014—1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當于氮克數;
m—樣品的質量(體積),g(ml);
F—蛋白質系數,按16%計算乘以6.25即為蛋白質。
(空白測定:用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)
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